中草藥對弧菌的抑制作用研究論文
摘 要：目的 闡明現常用抑菌中草藥在水產(chǎn)養殖業(yè)的用藥療效，為水產(chǎn)養殖細菌性疾病的防治提供用藥參考。方法 采用微量肉湯稀釋法測定了12種水產(chǎn)養殖常用的抗菌中藥產(chǎn)品對5株常見(jiàn)海洋致病菌的最低抑菌濃度(MIC)。結果 NZ方與市售“蝦倍健”抑菌效果最佳，對副溶血弧菌、嗜水氣單胞菌、創(chuàng )傷弧菌、哈維弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌濃度在0.313～1.250 g/L，而其他市售抗菌中草藥大黃末、六味黃龍散、三黃散、根蓮解毒散、七味板藍根散、大蒜素、病毒速滅亡、穿梅三黃散、白頭翁口服液、健肝寶和地錦草末對5種海洋致病菌抑制濃度均大于40.000 g/L。 結論 給水產(chǎn)養殖細菌性疾病的防治提供了用藥建議及使用參考。
關(guān)鍵詞：NZ方; 弧菌; 中草藥
近年來(lái)，隨著(zhù)對蝦疾病的爆發(fā)越來(lái)越頻繁，我國對蝦養殖業(yè)特別是華南地區的對蝦養殖受病害肆虐情況嚴重，部分地區對蝦幼體患病死亡率達100%，給殖業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失，如何有效防治對蝦病害侵襲也倍受水產(chǎn)業(yè)界人士關(guān)注和重視[1-2]。蝦的紅體、偷死、肌肉白濁、爛眼爛鰓、熒光、黑斑等癥狀多由弧菌及嗜水氣單胞菌引起，而根據上述病癥，農業(yè)部“用藥指導”也給出相關(guān)的用藥建議。其中，大黃末、地錦草等被廣泛推薦應用。根據現行國家標準，抗菌類(lèi)中藥制劑有38種，筆者選取其中最為常用的.12種中藥制劑與NZ方對5株常見(jiàn)的海洋致病菌進(jìn)行體外抑菌作用的比較，為水產(chǎn)養殖細菌性疾病的防治提供用藥參考。
1 材料與方法
1.1 菌株
標準菌株：副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticuss，V.p);溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus，V.a);哈維氏弧菌(Vibro harveyi，V.h);創(chuàng )傷弧菌(Vibrio vulnificus，V.v);嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，A.h)由中國南海研究所提供。
1.2 培養基
2216E 液體培養基(青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)。2216E瓊脂培養基(青島高科園海博生物技術(shù)有限公司)。
1.3 藥物及其制備
NZ方(檵木葉、半邊蓮花、地膽草等8味)：由中藥開(kāi)發(fā)研究所研制。大黃末：每1 kg飼料用本品5.0 g;六味黃龍散：每1 kg飼料用本品4.0 g。三黃散：每1 kg飼料用本品5.0 g;根蓮解毒散：每1 kg飼料加本品10.0 g。七味板藍根散;每1 kg飼料用本品2.5 g;大蒜素：每1 kg飼料用本品0.6 g。蝦倍�。好�1 kg飼料用本品4.0 g;病毒速滅亡：每1 kg飼料，用本品20 mL。穿梅三黃散：每1 kg飼料用本品4.0 g;白頭翁口服液：每1 kg飼料用本品3 mL。健肝寶：每1 kg飼料用本品2.0 g;地錦草末：每1 kg飼料用本品10.0 g。分別取上述藥物16.0 g制備成100 mL藥液。
1.4 儀器
儀器：分析天平(BT211B，德國Sartorius公司);手提式壓力蒸汽滅菌鍋(OIJ2006-04，上海東亞壓力容器制造有限公司);雙人單面凈化工作臺(SW-CJ-2FD，蘇州凈化設備有限公司);恒溫培養箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。
1.5 藥物配制
將受試藥物用適宜溶劑配制成0.8 g/ mL的藥液，高壓滅菌后，按二倍遞減濃度稀釋?zhuān)才渲瞥?1個(gè)梯度濃度的藥物稀釋液。
1.6 菌種復蘇與培養
將冷藏保存的菌種在瓊脂板上劃線(xiàn)培養復蘇24 h，再挑取生長(cháng)良好的單菌落接種到裝有2216E肉湯培養基的搖菌管中，置恒溫培養箱中37 ℃培養至對數期。
1.7 測量
以2216E肉湯作為空白對照液調零，在波長(cháng)600 nm處測定菌懸液OD值，計算含菌數，并稀釋成1×106 CFU/ mL的菌懸液。
1.8 加樣孵育
按無(wú)菌操作吸取藥液和菌懸液各100 μl于96孔板第1-11孔中，第12孔加入配制溶劑和菌懸液各100 μl作陰性對照，置恒溫培養箱中37 ℃培養20 h。
1.9 結果判讀
肉眼觀(guān)察，藥物最低濃度孔無(wú)細菌生長(cháng)者，即為該試菌MIC值。難判斷者，可將該孔中培養液于無(wú)菌瓊脂板上劃線(xiàn)，37 ℃培養20 h后讀取結果。
2 結果與分析
NZ方與12種市售抑菌中藥品對5種危害較大的海洋致病菌的最低抑菌濃度的測定結果可知，蝦倍健抑菌濃度最低，抑菌效果最佳，對副溶血弧菌、嗜水氣單胞菌、創(chuàng )傷弧菌的最低抑菌濃度為0.313 g/L;對哈維弧菌、溶藻弧菌的最低抑菌濃度為1.250 g/L;穿梅三黃散次之，在5.000～40.000 g/L;而大蒜素、病毒速滅亡、根蓮解毒散的抑菌效果最差，均在40.000 g/L以上，見(jiàn)表1。
對12種藥品與NZ方的最低抑菌濃度及其標示用量進(jìn)行比較，其中僅有蝦倍健標示用量大于最低抑菌濃度，也就是說(shuō)，按產(chǎn)品標示用法用量，僅有蝦倍健能達到預期抑菌效果，見(jiàn)表2。
3 討論
根據上述研究結果顯示，市面上抗菌藥物種類(lèi)繁雜，而養殖戶(hù)面對細菌感染疾病的爆發(fā)卻無(wú)可奈何，盲目用藥，直接損害了養殖戶(hù)的利益[6-7]。在筆者隨機選取的10余種常用抗菌中藥的實(shí)驗結果看來(lái)，情況令人堪憂(yōu)，這些在養殖過(guò)程中的應用十分廣泛的藥品，在對其進(jìn)行的最低抑菌濃度試驗中其最低抑菌濃度根本無(wú)法達到抑菌防治效果[8]。
隨著(zhù)抗生素在水產(chǎn)養殖的廣泛使用。近年來(lái)，耐藥菌的不斷產(chǎn)生，養殖戶(hù)對細菌性疾病的爆發(fā)束手無(wú)策，給養殖業(yè)帶來(lái)重大的損失，中草藥以其安全、副作用小、無(wú)耐藥性等獨特的優(yōu)勢，逐漸成為研究和開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)，市面上標榜抗菌的中草藥五花八門(mén)，但加工粗糙，質(zhì)量良莠不齊，夸大藥效，導致養殖戶(hù)用藥無(wú)效，對中草藥產(chǎn)品失去信心[9-11]。
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