剖析肝纖維化中的肝臟樹(shù)突狀細胞的作用論文
肝臟纖維化是組織器官損傷后引發(fā)的一個(gè)多細胞參與的損傷修復過(guò)程，主要表現為肝臟內細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)的過(guò)度沉積。肝纖維化(hepaticfibrosis)常繼發(fā)于各種慢性炎癥損傷，其發(fā)生發(fā)展過(guò)程主要依賴(lài)于多種類(lèi)型細胞及細胞因子的聯(lián)合作用，例如肝細胞、肝星狀細胞(hepaticstellatecells，HSCs)、肝樹(shù)突狀細胞(dendriticcells，DCs)、自然殺傷(naturalkiller，NK)細胞以及內皮細胞等，但其具體機制至今尚未明確。目前，很多學(xué)者認為肝纖維化的主要發(fā)病機制是在肝臟持續損傷過(guò)程中，HSCs大量活化增殖，并轉變?yōu)榧〕衫w維細胞(MFB)，從而分泌大量膠原并合成ECM，促使其生成與降解失衡，最終導致肝纖維化的發(fā)生。近年來(lái)大量研究表明，免疫系統的激活與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其中尤以DCs在肝纖維化中的作用最為明顯。研究發(fā)現，肝DCs作為免疫反應的重要媒介，在介導肝纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，尤其在肝纖維化發(fā)展的中期，DCs通過(guò)介導炎癥反應，釋放大量炎癥介質(zhì)，激活HSCs，進(jìn)而促進(jìn)ECM的生成，從而加劇肝纖維化的損傷。令人欣喜的是，研究還發(fā)現，肝纖維化的發(fā)展過(guò)程是可逆的，但臨床上對該病尚缺乏行之有效的治療手段。本文對DCs在肝纖維化中的作用研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，著(zhù)重探討DCs介導肝纖維化發(fā)生發(fā)展的內在機制，為臨床針對DCs開(kāi)展肝纖維化的研究提供重要參考。
1 DCs的生理功能及其在肝臟中的作用
DCs起源于骨髓，是體內數量極少且具有異質(zhì)性的細胞群體，廣泛分布在多數淋巴和非淋巴組織器官。體內的DCs按其成熟程度可分為成熟和未成熟兩類(lèi)，且具有不同的生物學(xué)特征。機體在正常狀態(tài)下，DCs處于未成熟狀態(tài)，此時(shí)細胞具有較強的抗原內吞加工處理能力，參與誘導免疫耐受;當DCs捕獲抗原后，經(jīng)淋巴管遷移至次級淋巴組織，并在此過(guò)程中自發(fā)成熟，將抗原提呈給T細胞，激活T細胞免疫應答。因此，DCs是連接初始免疫應答和獲得性免疫應答的重要橋梁。研究表明，DCs在肝臟內的分布較少，占肝內細胞總數較低，且人體肝活檢免疫組化結果顯示，DCs主要分布在肝門(mén)靜脈管道的周?chē)�，少量分布在肝�?shí)質(zhì)區。DCs由血液經(jīng)肝竇遷移入淋巴結，因此肝竇可以作為肝DCs的重要富集區。在穩定條件下，肝DCs根據不同的功能和形態(tài)可分為兩種細胞類(lèi)型：漿細胞樣DCs(pDCs)和傳統DCs(cDCs)。小鼠早期過(guò)繼轉移實(shí)驗表明，肝DCs主要起源于骨髓共同淋巴系前體細胞(CLP)和共同髓系前體細胞(CMP)。最近的研究發(fā)現，FMS樣酪氨酸激酶3(FMSliketyrosinekinase3，Flt3)配體可以促進(jìn)DCs的發(fā)育，小鼠敲除Flt3后，肝臟DCs的數量明顯降低，因此，Flt3可作為DCs發(fā)育過(guò)程中譜系限制性前體的標志物。DCs作為體內抗原呈遞能力最強的專(zhuān)職抗原提呈細胞，能夠介導肝臟免疫系統的激活和炎癥反應的發(fā)生，從而影響肝臟正常的生理功能。進(jìn)一步研究發(fā)現，DCs在肝臟的免疫耐受及肝穩態(tài)的維持過(guò)程中的也發(fā)揮著(zhù)重要作用。
2 DCs在肝纖維化的作用
2.1 DCs的促肝纖維化作用
在肝纖維化病程中期，大量的成熟的DCs會(huì )聚集到肝臟損傷部位并分泌大量的炎性介質(zhì)，促進(jìn)肝臟炎癥和纖維化的發(fā)生。Bleier等首次報道了DCs的動(dòng)力學(xué)特征和功能變化對膽管結扎(bileductligation，BDL)肝纖維化的影響。結果表明，對小鼠實(shí)施BDL2周后，肝內DCs數量擴增至原來(lái)的15倍，且髓系DC亞群占DCs總數的比例從原來(lái)的20%增加至80%;體外進(jìn)一步研究發(fā)現，經(jīng)脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)誘導后DCs可分泌大量的炎性因子，進(jìn)而激活T細胞，活化的T細胞浸潤并且進(jìn)行性損害肝實(shí)質(zhì)，促進(jìn)肝纖維化的發(fā)展。Connolly等在瘦素/硫代乙酰胺造肝纖維化小鼠模型中同樣也發(fā)現，肝內DCs數量明顯增加，且體外分離孵育24h后，產(chǎn)生的炎性因子是正常小鼠中分離的DCs的2倍;從正常小鼠和纖維化小鼠肝臟分離非實(shí)質(zhì)細胞(nonparenchymalcell，NPC)，在無(wú)外源性刺激物L(fēng)PS作用下孵育24h，纖維化小鼠NPC中促肝纖維化的細胞因子和趨化因子的表達量比正常組增加了近100倍;而纖維化小鼠肝臟NPC除去DCs后，其相應的細胞因子和趨化因子表達量沒(méi)有明顯增加。這一結果證實(shí)DCs對肝纖維化時(shí)炎癥環(huán)境的重要調控作用，清除DCs能明顯降低肝臟纖維化環(huán)境中促纖維化的細胞因子和趨化因子大量增加的趨勢。進(jìn)一步將分離的DCs與HSCs共培養，發(fā)現DCs可以誘導HSCs的增殖與活化。以上研究表明，在肝損傷纖維化炎癥反應中，清除DCs可起到抗肝纖維化的作用。
2.2 DCs的抗肝纖維化作用
有趣的是，最新研究發(fā)現，在肝纖維化的早期和肝纖維化消退期，DCs又具有抗纖維化的作用。Blois等運用硫代乙酰胺/四氯化碳造模小鼠肝纖維化，在纖維化早期，條件性地單次注射DT耗竭DCs。結果發(fā)現DCs的耗竭會(huì )加速膠原的沉積，促進(jìn)血管生成從而加劇肝纖維化。Henning等在非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis，NASH)早期運用CD11c.DTR小鼠模型也得到類(lèi)似結果。實(shí)驗發(fā)現耗竭DCs后，肝細胞損傷速度加快，誘導肝纖維化的發(fā)生。同時(shí)，在乙型病毒性肝炎(HBV)導致的肝纖維化早期，體外擴增DCs并回輸至HBV患者體內，也同樣發(fā)現DCs可促進(jìn)病毒的清除，加速肝纖維化的逆轉。在肝臟損傷停止后的肝纖維化消退期，研究者采用DT條件性剔除小鼠CD11c+細胞，發(fā)現肝纖維化的逆轉受到明顯的抑制，活化HSCs清除率降低。但是之后在CD11cDTR小鼠模型中鑒別出中性粒細胞，這暴露出了之前研究存在的局限性，因為中性粒細胞同樣能生成活性氧和金屬蛋白酶進(jìn)而影響纖維化。為了進(jìn)一步確證DCs逆轉肝纖維化作用，Jiao等用FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)誘導小鼠體內DCs擴增，結果發(fā)現DCs的擴增能加速肝纖維化的逆轉。那么DCs介導調控肝纖維化發(fā)展的內在機制究竟是什么呢?
3 DCs介導調控肝纖維化發(fā)生發(fā)展的作用機制
針對DCs在肝纖維化過(guò)程中的雙向調控作用，同時(shí)也為了更好地靶向調控DCs治療肝纖維化，近年來(lái)科研人員將更多的時(shí)間與精力投入在其調控肝纖維化的內在機制研究上，并獲得了許多重要的發(fā)現�？偨Y起來(lái)主要有以下幾種內在機制：
3.1 DCs促肝纖維化的分子機制 在慢性肝損傷過(guò)程中，研究者發(fā)現成熟的DCs可分泌大量的IL6和TNFα，一方面IL6激活T細胞，促進(jìn)免疫反應，進(jìn)一步介導肝細胞損傷;另一方面，大量的TNFα和IL6還可促進(jìn)纖維母細胞的增殖，合成大量的ECM，并且能誘導單核細胞高表達基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(tissueinhibitorofmetalloproteinase，TIMP1)mRNA，TIMP1可抑制分解ECM的MMP9的活性。研究還發(fā)現肝臟髓系DCs大量募集的原因是由于GR1+細胞分泌了單核細胞趨化蛋白1(monocytechemotacticprotein1，MCP1)，作為一個(gè)促纖維化的趨化因子，它能夠介導肝臟炎癥反應，進(jìn)而誘導肝纖維化。此外，研究表明DCs可直接附著(zhù)于成纖維細胞表面，注射DT誘導DCs耗竭，可破壞成纖維細胞的結構，同時(shí)抑制成纖維細胞的增殖[23]，進(jìn)而減少胞外ECM的沉積。值得一提的是DCs還可表達轉化生長(cháng)因子β(transforminggrowthfactor，TGFβ)，TGFβ家族可與TβR受體結合，通過(guò)Ras/ERK和STATs途徑發(fā)生磷酸化，激活HSCs胞質(zhì)內的信號轉導分子Smad蛋白，進(jìn)而誘導HSCs活化并向MFB轉變，促進(jìn)ECM的沉積，參與肝纖維化的形成。同時(shí)，肝DCs細胞能表達一系列toll樣受體(tolllikereceptor，TLRs)，而TLRs與肝纖維化的發(fā)病機制直接相關(guān)。肝受到損傷后，肝內的LPS增加，DCs表面的TLRs，尤其是TLR4表達增加。DCs能通過(guò)其表面的LPS/TLR4信號轉導產(chǎn)生的TNFα增強HSCs以及T細胞介導的炎癥反應，促進(jìn)肝纖維化。
3.2 DCs抗肝纖維化的分子機制
Blois等研究發(fā)現纖維化發(fā)生早期，DCs可分泌較多的可溶性血管內皮生長(cháng)因子受體1(solublefmsliketyrosinekinase，Flt1)，而sFlt1是一抗血管生成的強力因子，可與血管內皮生長(cháng)因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)特異性結合，從而抑制VEGF誘導的血管生成。研究還發(fā)現，在非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis，NASH)導致的.肝纖維化初期，壞死的肝細胞釋放的內容物因子可作用于DCs表面TLR9，進(jìn)而分泌大量的IL10，IL10是一種抑制炎性單核細胞活性的免疫調節因子，可降低肝臟中TNFα、IL6以及活性氧類(lèi)(ROS)的釋放，從而減輕肝臟損傷程度，抑制肝纖維化的發(fā)展。進(jìn)一步的研究發(fā)現，DCs不僅可誘導增強T細胞的抗病毒作用，促進(jìn)病毒的清除，還能分泌大量的INFγ，引起HSCs的凋亡和細胞周期的阻滯，從而抑制肝纖維化。肝纖維化的實(shí)質(zhì)是HSC大量活化增殖，促使肝內ECM生成與降解的失衡，過(guò)度產(chǎn)生的ECM在病變肝組織中沉積。研究者發(fā)現，在肝臟損傷停止后的肝纖維化消退期，DCs可分泌大量的MMP9，催化降解肝內過(guò)度沉積的ECM，而當小鼠缺失MMP9基因時(shí)，遷移的DCs則不能有效促進(jìn)ECM的降解。此外研究還發(fā)現NK細胞作為一種自身免疫淋巴細胞，可被DCs激活，進(jìn)而特異性識別活化的HSCs，并對HSCs產(chǎn)生明顯的殺傷作用，從而抑制肝纖維化的發(fā)生。以上的研究結果表明，在肝臟損傷停止后，體內誘導DCs的擴增可能是治療肝纖維化的新策略。
4 小結
近年來(lái)DCs在肝纖維化中的作用逐漸受到重視，DCs與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展有著(zhù)密切的關(guān)系，并且在肝纖維化的不同階段顯示出不同的作用，表現為雙向調控作用(Fig1)。因此，針對肝纖維化不同時(shí)期來(lái)調節DCs的功能，可能成為免疫學(xué)角度治療肝臟纖維化的新靶標。然而，有關(guān)DCs在肝損傷纖維化模型中作用的研究還存在許多不足，例如大部分研究主要集中在DCs對纖維化后期肝臟炎癥微環(huán)境的調控，沒(méi)有揭示DCs對纖維化的直接作用。其次，由于DCs缺乏明確的表面標志物，研究者在實(shí)驗中主要將CD11c+細胞默認為DCs，沒(méi)有特異性區分炎癥情況下同樣會(huì )表達該標志物的其他細胞，因此實(shí)驗結果還存在一定的爭議。
此外，研究中實(shí)驗方法往往采用較為單一的肝損傷纖維化模型(膽汁淤積或毒素)，而未在其他模型中進(jìn)行進(jìn)一步驗證。圍繞這些新的問(wèn)題，運用優(yōu)良的基因模型、分選流式細胞儀和形態(tài)特征對DCs標準化的鑒別，將有利于更全面的認識DCs在肝纖維化中的作用。
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