細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的繪制實(shí)驗報告范文
篇一:實(shí)驗五 微生物生長(cháng)量的測定及生長(cháng)曲線(xiàn)的繪制
一、實(shí)驗目的
學(xué)習了解微生物生長(cháng)量測定的方法
學(xué)習了解細菌生長(cháng)曲線(xiàn)的繪制方法
學(xué)習掌握血細胞計數板的使用方法
。ㄒ唬┪⑸锷L(cháng)量的測定
計數法 重量法 生理指標法
1、顯微鏡直接計數法
。1)利用血細胞計數板計數
。2)涂片計數
2、活菌菌落計數法
3、濾膜法
。ǘ┘毦L(cháng)曲線(xiàn)
將單細胞細菌接種到恒定容積的液體培養基中,不補充營(yíng)養物或移去培養物,細菌以二分裂方式繁殖,以時(shí)間為橫坐標,細菌數目的對數值為縱坐標,可畫(huà)出一條反映細菌在整個(gè)培養期間菌數變化規律的曲線(xiàn),稱(chēng)為生長(cháng)曲線(xiàn)(growth curve)
篇二:細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定
細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的測定
一、實(shí)驗目的
掌握測定細胞生長(cháng)曲線(xiàn)的.方法。
二、實(shí)驗器具
24孔細胞培養板、微量加樣器、eppendorf管、吸頭、吸頭盒、顯微鏡、細胞計數板、載玻片、蓋玻片、吸管、試管架、普通顯微鏡、細胞懸液、0.4%臺盼藍。
三、實(shí)驗方法
1. 培養細胞:首先在24孔細胞培養板內分別接種相同數量的細胞,計數并記錄接種的細胞懸液密度,接種時(shí)間記為0小時(shí)。
2. 計數細胞密度:從接種時(shí)間算起,每隔24小時(shí)計數3孔的細胞密度,算出平均值。為提高準確率,對每孔細胞可計數2-3次,如此操作至第七天結束。
3. 繪制曲線(xiàn):以培養時(shí)間為橫坐標、細胞密度為縱坐標,將全部結果在坐標紙上繪圖,即得所培養細胞的生長(cháng)曲線(xiàn)。
篇三:MTT法繪制生長(cháng)曲線(xiàn)
實(shí)驗材料:
1,5%FBS-L-DMEM, 5x104個(gè)/ml細胞懸液,5mg/mlMTT溶液,DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7個(gè),酶標儀,50ml離心管,1.5ml離心管,0.22μm濾膜,錫箔紙,MTT工作液(1ml/管)
實(shí)驗步驟:
1, 分別選取生長(cháng)良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制備成細胞懸液,調整細胞密度為5x104/ml。接種到96孔板,每孔接種200μl細胞懸液進(jìn)行培養(每孔1x104細胞)。
2, 培養16-48后,每天選擇6個(gè)培養孔各自加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,37℃繼續孵育。
3, 孵育4h后終止培養,吸出孔內上清,此時(shí)應該傾斜96孔板,用槍頭小心的將上清液吸去,不可吸去下面的結晶顆粒,慢慢吸去。每孔加入150μlDMSO,室溫振蕩10min,使結晶充分溶解,于試驗孔平行設不加細胞只加培養液的空白對照1孔。
注意事項:
【1】 1, 兩種方法分離小型豬骨髓間充質(zhì)干細胞的比較
分別取兩組0,1,3代細胞,制成1x103的細胞懸液,接種到96孔板,每孔細胞懸液200微升,置37℃、5%CO2飽和濕度孵箱內孵育,各組每24小時(shí)分別取出4孔,每孔加入MTT(2mg/ml)20微升 37℃孵育,4h后吸棄孔內培養液,每孔加入150微升分析純的二甲基亞砜,移至酶聯(lián)免疫檢測儀上振蕩10min,用分光光度計在492nm波長(cháng)處測定每孔的吸光度值(OD492),以OD(492)值為縱坐標,時(shí)間為橫坐標繪制生長(cháng)曲線(xiàn)
【2】 來(lái)自:SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離培養的實(shí)驗研究
大鼠MSCs生長(cháng)曲線(xiàn)測定:為了定量測定大鼠BMSCs的生長(cháng)狀況,對來(lái)源于同一動(dòng)物的原代細胞進(jìn)行連續培養。分別選取生長(cháng)良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制備成細胞懸液,調整細胞密度為5x104/ml。接種到96孔板,每孔接種200μl細胞懸液進(jìn)行培養(每孔1x104細胞)。次日起每天選擇6個(gè)培養孔各自加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,37℃繼續孵育4h后終止培養,吸出孔內上清,每孔加入150μlDMSO,室溫振蕩10min,使結晶充分溶解,于試驗孔平行設不加細胞只加培養液的空白對照1孔。在酶標儀上選擇570nm波長(cháng),以空白孔調零,測定各孔吸光度(A)值,連續測7天,以時(shí)間為橫軸,A值為縱軸繪制細胞生長(cháng)曲線(xiàn)。
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