解剖實(shí)驗報告

　　蛙類(lèi)坐骨神經(jīng)–腓腸肌標本制備、不同頻率刺激對肌肉收縮的影響

　　一．目的要求

　　1. 掌握蛙類(lèi)雙毀髓的試驗方法；

　　2. 掌握坐骨神經(jīng)—腓腸肌標本標本的制作方法；

　　3. 觀(guān)察不同刺激頻率對骨骼肌收縮形式的影響。

　　二．基本原理

　　蛙類(lèi)動(dòng)物的某些基本活動(dòng)，如神經(jīng)的生物電活動(dòng)、肌肉收縮等與哺乳動(dòng)物相似。其離體組時(shí)所需的生活條件比較簡(jiǎn)單，易于控制和掌握，而且動(dòng)物來(lái)源豐富，因此在生理實(shí)驗中常用蛙類(lèi)的坐骨神經(jīng)—腓腸肌標本和坐骨神經(jīng)標本來(lái)觀(guān)察組織的興奮性、刺激與反應的規律以及骨骼肌收縮的特點(diǎn)等。肌肉受到一次閾上刺激而產(chǎn)生的一次收縮為單收縮，其過(guò)程可分為三個(gè)時(shí)相，即潛伏期、縮短期和舒張期。肌肉受到連續的閾上刺激時(shí)，如果刺激間隔小于單收縮的過(guò)程，相鄰兩單收縮的時(shí)相會(huì )出現融合，表現為強直收縮現象。如果表現為每次收縮的開(kāi)始發(fā)生在上次收縮的縮短期，稱(chēng)完全強直收縮，如果表現為每次收縮的開(kāi)始發(fā)生在上次收縮的舒張期，稱(chēng)不完全強直收縮。使用生物信號采集處理系統，可以觀(guān)察到腓腸肌收縮的情況。

　　三．實(shí)驗材料

　　實(shí)驗動(dòng)物：健康青蛙一只；

　　實(shí)驗器材和藥品：蛙類(lèi)手術(shù)器械一套（粗剪刀一把，組織剪一把，眼科剪一把，鑷子一把，探針一根、玻璃分針2把，蛙釘4個(gè)、培養皿一個(gè)，蛙板一個(gè)、滴管一個(gè)、棉線(xiàn)若干），張力換能器，肌槽，刺激電極，鐵架臺，生物信號采集處理系統，微機，任氏劑。

　　四．實(shí)驗步驟

　　搗毀蟾蜍腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來(lái)水沖洗干凈。左手握蛙，用食指下壓頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯。中指與無(wú)名指夾其前肢，無(wú)名指與小指夾其后肢，使整個(gè)軀干做最大屈曲。把探針自枕骨大孔處垂直刺入，到達椎管，即將探針改變方向刺入顱腔，向各側不斷攪動(dòng)，徹底搗毀腦組織；再將探針原路退出，刺向尾側，捻動(dòng)探針使其逐漸刺入整個(gè)椎管內，完全徹底搗毀脊髓。脊髓破壞完全的標志是：下頜呼吸運動(dòng)消失，反射消失，四肢松軟。

　　剪除軀干上部和內臟，去皮，制備下肢標本： 用粗剪刀在骶髂關(guān)節前1厘米處剪斷脊柱，握住蟾蜍下肢，沿軀干兩側（避開(kāi)坐骨神經(jīng)）剪開(kāi)腹壁。此時(shí)軀干上部及內臟即全部下垂。剪除全部軀干及內臟組織。剪去肛周皮膚；用圓頭鑷子夾住脊柱，注意不要碰到坐骨神經(jīng)，捏住皮膚邊緣，逐步向下?tīng)坷瓌冸x皮膚。將全部皮膚剝除后，把標本置于盛有任氏液的培養皿中。 2.1.1.3洗凈雙手和用過(guò)的全部手術(shù)器械。

　　分離兩下肢： 避開(kāi)坐骨神經(jīng)，用粗剪刀從背側剪去骶骨，然后沿中線(xiàn)將脊柱剪成左右兩半，再從恥骨聯(lián)合中央剪開(kāi)，將已分離的標本浸入盛有任氏液的培養皿中。 2.1.1.5 取出一下肢，用蛙釘固定于蛙板上，固定時(shí)要注意，坐骨神經(jīng)和腓腸肌朝上。先用玻璃分針沿脊柱側游離坐骨神經(jīng)腹腔部，然后循股二頭肌和半膜肌之間的坐骨神經(jīng)溝，縱向分離暴露坐骨神經(jīng)之大腿部分直至腘窩，在分離過(guò)程中，把神經(jīng)周?chē)�的結締組織去除干凈，并把神經(jīng)的細小分支剪斷，但要注意不要用金屬器械碰觸神經(jīng)，也不要對神經(jīng)過(guò)度牽拉。實(shí)驗期間應不斷滴加任氏液使神經(jīng)保持濕潤。

　　用玻璃分針游離腓腸肌，并在下面穿線(xiàn)，在跟腱處打結。在結扎線(xiàn)的下方剪斷跟腱，在膝關(guān)節處把除腓腸肌外的小腿其他部分剪除。注意保持完整的腓腸肌。 2.1.1.7用棉線(xiàn)在靠近脊柱的位置結扎坐骨神經(jīng)，并在結扎線(xiàn)的上方剪斷神經(jīng)，用眼科剪剪斷坐骨神經(jīng)的全部支。從腘窩處開(kāi)始剪掉大腿所有的肉，盡量把股骨刮干凈，在膝關(guān)節上至少1cm處剪去上段股骨。將標本浸入任氏劑的培養皿中。

　　實(shí)驗裝置與儀器連接：1.將標本股骨殘端固定在肌槽上的小孔內；2.將結扎腓腸肌肌腱的.棉線(xiàn)與張力換能器連接，調節棉線(xiàn)的松緊，要與桌面垂直；3.將神經(jīng)置于肌槽的刺激電極上，用任氏劑保持標本濕潤；4.刺激電極插入微機上的刺激輸入孔；5.張力換能器與微機相應通道相連。

　　打開(kāi)電腦，進(jìn)入生物信號采集處理系統，在菜單欄選擇“實(shí)驗項目”--------》“神經(jīng)肌肉”-------》“刺激強度與反應的關(guān)系實(shí)驗模塊”點(diǎn)擊開(kāi)始，調節刺激參數，使頻率自動(dòng)逐漸遞增，串間隔為2.連續記錄不同頻率時(shí)的肌肉收縮曲線(xiàn)。

　　五．結果與分析

　　不同頻率刺激對肌肉收縮的影響：串間隔為2,頻率增量為1時(shí)的張力變化（如圖）可見(jiàn)單收縮、不完全強直收縮、完全強直收縮。

　　分析：刺激強度到達閾刺激時(shí)腓腸肌開(kāi)始收縮，在最大刺激收縮力前隨刺激強度增大而增大，到達最大刺激強度后，收縮力不發(fā)生明顯改變；在最大刺激強度條件下，某較小頻率使腓腸肌發(fā)生單收縮(如圖中第一次刺激)，頻率增大到，單收縮變?yōu)椴煌耆珡娭笔湛s（如圖中第2-6次刺激），頻率繼續增大，不完全強直收縮變?yōu)橥耆珡娭剖湛s（如圖中第7、8次刺激）。不同的腓腸肌其閾刺激，最大刺激均存在差異；其單收縮，不完全強直收縮和完全強直收縮所要頻率也不盡相同。

　　六．實(shí)驗總結

　　本次試驗嚴格按照操作步驟進(jìn)行，所得實(shí)驗結果較為理想，很容易觀(guān)察到腓腸肌的單收縮、不完全強直收縮、完全強直收縮現象。在實(shí)驗的過(guò)程中，制備坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本是最繁瑣的步驟，也是實(shí)驗成功的關(guān)鍵所在，期間，我們進(jìn)行的比較緩慢，生怕弄錯了哪一步，一步步想原理、回憶老師是怎么說(shuō)的，所幸的是我們最終成功了，得到了較好的結果，在這次的不斷嘗試和思考中，很好地鍛煉了我們的動(dòng)手能力和思維能力。

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