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發(fā)酵現象實(shí)驗報告

時(shí)間:2022-01-26 10:24:36 報告 我要投稿

發(fā)酵現象實(shí)驗報告

  隨著(zhù)社會(huì )一步步向前發(fā)展,接觸并使用報告的人越來(lái)越多,通常情況下,報告的內容含量大、篇幅較長(cháng)。那么大家知道標準正式的報告格式嗎?下面是小編收集整理的發(fā)酵現象實(shí)驗報告,希望能夠幫助到大家。

發(fā)酵現象實(shí)驗報告

發(fā)酵現象實(shí)驗報告1

  一、實(shí)驗目的

 。1)掌握搖床發(fā)酵法制備糖化酶的工藝流程及操作方法

 。2)了解利用黑曲霉菌菌種發(fā)酵時(shí)的生長(cháng)條件及注意事項

 。3)熟練掌握實(shí)驗過(guò)程中的無(wú)菌操作和培養條件的選擇

  二、實(shí)驗儀器及試劑

  菌種:黑曲霉

  儀器:錐形瓶(500ml)、移液管、恒溫水浴鍋、秒表、50mL比色管、牛皮紙、紗布(8層)、pH計。

  藥品:三水乙酸鈉、冰醋酸、硫代硫酸鈉、碘、氫氧化鈉、硫酸、可溶性淀粉、玉米粉、豆餅粉、麩皮

  三、實(shí)驗原理

  搖瓶發(fā)酵是實(shí)驗室常用的通風(fēng)發(fā)酵方法,通過(guò)將裝有液體發(fā)酵培養基的搖瓶放在搖床上振蕩培養,以滿(mǎn)足微生物生長(cháng)、繁殖及產(chǎn)生許多代謝產(chǎn)物對氧的需求。它是實(shí)驗室篩選好氣性菌種,以及摸索種子培養工藝與發(fā)酵工藝的常用方法。

  葡萄糖淀粉酶(EC3.2.1.3)系統名為淀粉α-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶,俗稱(chēng)糖化酶,是國內產(chǎn)量最大的酶品種。糖化酶對淀粉分子的作用是從非還原末端切開(kāi)α-1,4鍵,也能切開(kāi)α-1,3鍵和α-1,6鍵,產(chǎn)生葡萄糖。

  糖化酶有催化淀粉水解的作用,能從淀粉分子非還原末端開(kāi)始,分解α-1,4-葡萄糖苷鍵生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基,能被次碘酸鈉氧化,過(guò)量的次碘酸鈉酸化后析出碘,再用硫代硫酸鈉標準溶液滴定,計算酶活力。

  四、實(shí)驗步驟

  1.培養步驟

  1.1種子培養基制備及滅菌

  將新鮮土豆去皮切塊,稱(chēng)取200~300 g土豆塊放入500 mL燒杯中,加入一定量水,在電爐上煮沸至土豆塊熟透,用120目紗布過(guò)濾,濾渣反復用一定量水清洗、過(guò)濾2次,合并各次濾液且定容至1000 mL即得土豆汁。取一定體積的土豆汁,在其中加入5%的蔗糖,溶解搖勻并調pH至5.5,即得種子培養基。將適量種子培養基倒入錐形瓶(250ml),用紗布塞塞住管口,并用牛皮紙包扎,置滅菌鍋中,于121℃下滅菌30min。待滅菌完畢,冷卻取出。

  1.2發(fā)酵培養基制備及滅菌

  取6只500mL搖瓶,分別按裝液量100、200、300mL配制培養基(玉米粉6%、豆餅粉2%、麩皮1%),加水后稍微搖動(dòng),使原料濕潤,浸入水中。用8層紗布包扎瓶口,再加牛皮紙包扎。置滅菌鍋中,于121℃下滅菌30min。

  1.3發(fā)酵培養基接種:將已生長(cháng)好的菌種,在無(wú)菌條件下,按照10%的接量(8%-12%)接種到發(fā)酵培養基上。

  1.4發(fā)酵培養基發(fā)酵:將搖瓶固定在搖床上,培養溫度為31℃,轉速為120r/min,培養時(shí)間96h。顯微鏡觀(guān)察菌絲形態(tài),用試紙測發(fā)酵液pH,測定酶活力。搖瓶培養時(shí)觀(guān)察各種搖瓶機的結構。

  2.糖化酶活力測定

  2.1待測酶液的制備:

  精確吸取液體酶1.00mL,先用少量的乙酸緩沖液溶解,并用玻璃棒搗研,將上清液小心傾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量緩沖液,最后全部移入容量瓶中,用緩沖液定容至刻度(估計酶活力在100~250u/mL范圍內),搖勻。通過(guò)4層紗布過(guò)濾,濾液供測定用。

  2.2酶活力測定:

  于甲、乙兩支50mL比色管中,分別加入可溶性淀粉溶液25mL及緩沖液5mL,搖勻后,于40℃恒溫水浴中預熱5min。在甲管(樣品)中加入待測酶液2mL,立刻搖勻,在此溫度下準確反應30min,立刻各加入氫氧化鈉溶液0.2mL,搖勻,將兩管取出迅速冷卻,并于乙管(空白)中補加待測酶液2mL。吸取上述反應液與空白液各5mL,分別置于碘量瓶中,準確加入碘溶液10mL,再加氫氧化鈉溶液15mL,搖勻塞緊,于暗處反應15min。取出,加硫酸溶液2mL,立即用硫代硫酸鈉標準液滴定,直至藍色剛好消失為其終點(diǎn)。

  2.3酶活力計算:

  樣品酶活力(u/g或u/mL)=579.9×(A-B)c×n式中:A與B分別為空白、樣品消耗硫代硫酸鈉標準溶液的體積,mL;c為硫代硫酸鈉標準溶液的濃度,mol/L;n為稀釋倍數。

  五、數據分析

  比較不同裝液量下的菌體形態(tài)特征、酶活力,將結果填入下表:

  裝液量/mL

  指標

  酶活力

  pH

  菌體特征 100 420u/mL 4.2 200 510u/mL 4.1 300 570u/mL 3.8 出現球狀的白色的菌絲團,瓶壁上出現黑絲的孢子和菌絲

  六、結論

  1.不同的裝液量對酶活力的影響是隨著(zhù)裝液量的增加呈現上升的趨勢,但是酶活力變化不大,并且酶活力不高,與其他組數據相比接種量跟酶活力關(guān)

  2.菌體特征在錐形瓶的瓶壁上出現白色的菌絲,在培養基中也出現了絲球

  3.菌種新陳代謝的旺盛二氧化碳的釋放增加,使pH值逐漸下降,最終使培養基的pH下降至3.8左右。

發(fā)酵現象實(shí)驗報告2

  探究酵母菌在無(wú)氧條件下發(fā)酵作用產(chǎn)生二氧化碳和酒精。

  實(shí)驗儀器及用品:

  1.實(shí)驗儀器:帶膠塞和膠管的錐形瓶、小氣球、Y形管、大燒杯、溫度計、試管、比色板、小燒杯、玻璃棒。

  2.實(shí)驗用品:白糖(100g)、一小包干酵母(約30g)、澄清的石灰水、酒精、橙色的重鉻酸鉀溶液。(檢測酒精的試劑。0.5ml的濃硫酸溶有0.1g重鉻酸鉀,體積分數為95%—97%,在酸性條件下與酒精發(fā)生化學(xué)反應由橙色變?yōu)榛揖G色)

  實(shí)驗裝置及說(shuō)明:

  澄清的石灰水可以檢測氣體中有二氧化碳,重鉻酸鉀溶液遇到酒精由橙色變?yōu)榛揖G色。

  實(shí)驗操作:

  1.將(100ml)40℃溫水倒入錐形瓶,再用湯匙將一大勺糖及適量干酵母加進(jìn)來(lái),攪拌均勻后,將錐形瓶放在大燒杯中水浴保溫溫度保持在30—40 ℃左右。(先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸,是酵母菌迅速繁殖,并把葡萄糖分解成二氧化碳和水。)

  2.觀(guān)察到酵母菌培養液有氣泡產(chǎn)生,塞上橡膠塞(這樣做既可以避免氣體散失,影響后面實(shí)驗效果,也為酒精的產(chǎn)生提供保障)。過(guò)一段時(shí)間后就可看到干癟的氣球慢慢膨脹起來(lái)了。(酵母菌的無(wú)氧呼吸)

  3.將夾子打開(kāi),擠壓氣球,使瓶?jì)犬a(chǎn)生的氣體徐徐通過(guò)膠管導入試管內的澄清石灰水中,石灰水變渾濁了(檢測氣體中有二氧化碳。原理:二氧化碳遇石灰水,石灰水變渾濁)。

  4.將重鉻酸鉀試劑分別滴在比色板的凹槽內,并分別標注1號、2號(作對照)、3號。在3號試劑上滴1滴酒精,在1號試劑上滴1滴酵母菌發(fā)酵液。發(fā)現1號和3號都由橙色變成了灰綠色。

  實(shí)驗創(chuàng )新點(diǎn)及意義:

  通過(guò)上述實(shí)驗,讓我們對酵母菌“發(fā)酵現象”所需要的原料、

  條件及產(chǎn)生的物質(zhì)都有了較直觀(guān)的感受,比較容易理解課本上闡述的“酵母菌可以把葡萄糖轉化為酒精和二氧化碳”等有關(guān)內容,而且印象深刻。使我們養成很好的節約意識。

  實(shí)驗現象:

  1.聞到了發(fā)酵后特殊的甜酒的芳香氣味。

  2.詳見(jiàn)【實(shí)驗操作4】

  3.澄清的石灰水變渾濁

發(fā)酵現象實(shí)驗報告3

  一、實(shí)驗目的

  1.測定并繪制生長(cháng)曲線(xiàn)、底物消耗曲線(xiàn)和產(chǎn)物形成曲線(xiàn)

  2.了解發(fā)酵過(guò)程中葡萄糖的利用、菌體生長(cháng)和產(chǎn)物生成的相互關(guān)系

  3.初步學(xué)會(huì )菌體生長(cháng)、底物消耗和產(chǎn)物生成有關(guān)發(fā)酵參數的求解

  二、實(shí)驗儀器及試劑

  菌種:釀酒酵母

  儀器:錐形瓶(250ml)、移液管、pH計、生物傳感儀、分析天平

  藥品:酵母膏、胰蛋白胨、葡萄糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、苯甲酸鈉、EDTA鈉、氯化鈉

  三、實(shí)驗原理

  酵母菌是兼性厭氧型真菌,喜歡含糖的環(huán)境, 有氧時(shí)將葡萄糖分解成CO和水,無(wú)氧時(shí)將葡萄糖分解成酒精和二氧化碳,同時(shí)都釋放出能量

  生物傳感器由生物識別元件和信號轉換器組成,能夠選擇性地對樣品中的`待測物發(fā)出相應,通過(guò)生物識別系統和電化學(xué)或其他傳感器把待測物質(zhì)的濃度轉為電信號,根據電信號的大小定量測出待測物質(zhì)的濃度。生物傳感器是應用生物活性材料(如酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原、生物膜等)與物理或化學(xué)換能器有機結合的一門(mén)交叉學(xué)科,是發(fā)展生物技術(shù)必不可少的一種先進(jìn)的檢測方法與監控方法,也是物質(zhì)在分子水平的快速、微量分析方法

  四、 實(shí)驗步驟

  1.種子培養基(YEPD,g/L):稱(chēng)取酵母膏10g、胰蛋白胨20g、葡萄糖20g,加蒸餾水溶解,調節pH 5.0左右,并定容至1000ml。

  2.發(fā)酵培養基(g/L):稱(chēng)取酵母膏10g,胰蛋白胨20g,葡萄糖100g加蒸餾水溶解,調節pH 至5.0左右,定容至1000ml,分裝10個(gè)錐形瓶(250ml)封口121℃,30min滅菌。

  3.種子培養:將活化好的種子培養液,用移液管移去10ml接種于滅菌YEPD液體培養基中, 于30℃、120 r/min全溫搖瓶柜中培養24 h左右,觀(guān)察種子液的色澤、氣味與形態(tài)等基本情況。

  4.發(fā)酵方法:將培養好的種子液按8-12%的接種比例,接種于發(fā)酵培養基中,置于30 ℃、120 r/min全溫搖瓶柜中培養96 h。

  5.過(guò)程取樣:發(fā)酵培養基接種發(fā)酵后,每隔8小時(shí)取樣,移取45ml菌液至離心試管中3800r/min離心,上清液取出分析,菌泥放置烘箱烘干,分析菌體生物量、殘余葡萄糖濃度與酒精生成量,并以此為基礎數據計算參數

  6.生物量的測定:取等量的兩份發(fā)酵液,一份由烘干法測得菌體干重(DCW),另一份稀釋成一定的濃度于630 nm下測定吸光值(OD值),得到標準曲線(xiàn)為DCW=3.87×OD(R=0.996)。再以相同方法測得樣品的OD值,按標準曲線(xiàn)計算出菌體干重。

  7.還原糖的測定與乙醇的測定:使用生物傳感儀測定糖類(lèi)和酒精的含量

  五、 數據分析

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