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淺析高頻電磁輻射對大鼠血腦屏障的影響及參力膠囊防護作用論文

時(shí)間:2021-04-09 15:09:42 論文 我要投稿

淺析高頻電磁輻射對大鼠血腦屏障的影響及參力膠囊防護作用論文

  電磁輻射作為一種污染的方式越來(lái)越引起社會(huì )的廣泛關(guān)注。其標準界定300 MHz 以上即為高頻與微波頻段的輻射。手機、微波爐、電磁爐、電視等家電皆為高頻范圍。電磁輻射可引發(fā)中樞神經(jīng)系統認知能力障礙,使海馬神經(jīng)元受損,造成學(xué)習、記憶能力下降。血腦屏障( BBB) 是由基膜、腦毛細血管內皮細胞( BCECs) 和毛細血管周?chē)纳窠?jīng)膠質(zhì)膜構成的。其中BCECs 及其之間的緊密連接( TJ) 是構成BBB 的主要結構。本實(shí)驗通過(guò)對SD 大鼠海馬區血腦屏障的觀(guān)測,探討抗輻射類(lèi)的中藥制劑參力膠囊的保護作用。

淺析高頻電磁輻射對大鼠血腦屏障的影響及參力膠囊防護作用論文

  材料與方法

  1. 研究對象: 鼠齡8 周的健康SD 大鼠80 只,體重220 ~280 g,雄性,由大連動(dòng)物中心實(shí)驗室提供。大鼠隨機分為4 組,分別為正常對照組( A 組) ,模型組( B 組) 、參力低濃度組( C 組) 、參力高濃度組( D 組) ,每組20 只。每組按輻照后取材時(shí)間點(diǎn)又分為2 個(gè)亞組: 6 小時(shí)組和24 小時(shí)組,每組各10 只。

  2. 方法: 在實(shí)驗室條件下,適應性喂養7 天,以顆粒型大鼠飼料喂養( 含蛋白質(zhì)23%、脂肪4. 7%、鈉鹽0. 24%) ,飲用水為純凈水,室溫控制在21 ℃左右,相對濕度40% ~ 55%。各組按劑量給藥,用藥10 天。采用灌胃給藥法用藥后除A 組外,其余各組均給予高頻輻射: 大鼠自由體位,裝于塑料制整理箱中,置于輻射源醫科達公司Precise醫用直線(xiàn)加速器( 佳木斯大學(xué)附屬醫院核醫學(xué)科) 定點(diǎn)輻照,照射時(shí)間: 200 min,輻射功率: 10 kw/m2。輻射后觀(guān)察大鼠行動(dòng)、對刺激的反應。

  3. 檢測血腦屏障通透性: 于輻射后6 h 和24 h 時(shí),用10%的水合氯醛將大鼠麻醉,開(kāi)胸暴露心臟,剪開(kāi)右心耳,再從左心室插入注射針頭,用生理鹽水緩慢沖洗大鼠體內的血液,直至沖出清澈液體。此時(shí)換裝有40 ml 固定液硝酸鑭-戊二醛的注射器快速固定,斷頭取腦,放入硝酸鑭-戊二醛固定液中繼續固定。標本采集: 把灌注好的鼠腦切成1 mm3 的小塊泡到前固定液中固定,用含2%的硝酸鑭-四氧化鋨進(jìn)行后固定,0.1 mol /L 二甲胂酸鈉緩沖液( pH 7. 2 ~ 7. 4) 漂洗,丙酮梯度脫水,丙酮+ 包埋劑( 1∶ 1) 浸透過(guò)夜, 812 環(huán)氧樹(shù)脂包埋,超薄切片,醋酸鈾和枸櫞酸鉛雙染后,在JEM22000EX 型透射電鏡( 佳木斯大學(xué)電鏡室提供) 下觀(guān)察,拍片。

  結果

  1. 輻射后大鼠一般情況觀(guān)察結果: 各組大鼠造模前和造模后比較,輻射后的大鼠毛發(fā)沒(méi)有發(fā)生變化,B 組與A 組相比B 組大鼠行動(dòng)遲緩,較A 組出現對各組刺激反應遲鈍的現象。C 組及D 組與A 組比較,大鼠行動(dòng)基本沒(méi)有差異,對輕微刺激反應較為靈敏,C 組、D 組對刺激的表現沒(méi)有明顯差異。

  2. 透射電鏡( TEM) 檢測結果: A 組: TEM 下可見(jiàn)BBB 結構完好,間隙正常,硝酸鑭顆粒主要沉積在基膜外側,未穿過(guò)TJ。B 組: TEM 下可見(jiàn)BCECs TJ 間隙明顯增寬,間隙內可見(jiàn)鑭顆粒沉積,TJ 處也可見(jiàn)鑭顆粒沉積。鑭顆粒甚至可達星形膠質(zhì)細胞周?chē)。C 組: TEM 下可見(jiàn)硝酸鑭顆粒主要沉積在BCECs TJ,少量鑭顆粒穿過(guò)TJ。星形膠質(zhì)細胞周?chē)嘁?jiàn)少量鑭顆粒沉積。D 組: TEM 下可見(jiàn)硝酸鑭顆粒主要沉積在基膜外側,未穿過(guò)TJ。星形膠質(zhì)細胞周?chē)辔匆?jiàn)有鑭顆粒沉積,與A 組相仿。6 h 時(shí)和24 h時(shí)的電鏡圖片相比較,只有B 組有區別, 24 h 時(shí)可見(jiàn)硝酸鑭擴撒出血管的量明顯比6 h 時(shí)的多,其他組無(wú)明顯差異。

  參力膠囊,主要成份為黃芪、人參、靈芝孢子粉,有增強免疫力,抗輻射的功用。是一種無(wú)毒副作用的純中藥制劑。有研究表明,參力膠囊對輻射損造成的造血功能障礙有修復作用,并對輻照中的胸腺和脾臟有一定的保護作用。

  因此我們選用了參力膠囊作為實(shí)驗中藥物防護的方法。BBB 正常生理狀態(tài)下TJ 是致密的,可使神經(jīng)系統內環(huán)境相對穩定。本實(shí)驗通過(guò)TEM 觀(guān)察結果發(fā)現,高頻輻射可以使海馬BBB 通透性增加,導致大鼠行為學(xué)發(fā)生改變,說(shuō)明大鼠學(xué)習記憶受到損傷。當BBB 被破壞時(shí),微循環(huán)結構滲透壓平衡失調,產(chǎn)生血管性源性腦水腫,主要因為調節BBBTJ 功能的信號轉導機制造成的,如Ca2 + 調控,蛋白激酶途徑、膠質(zhì)細胞的調節以及蛋白磷酸化調節等原因。

  當這些原因引起信號轉到發(fā)生變化時(shí),海馬組織中的一些受體會(huì )發(fā)生變化,導致通透性的.改變。有研究證明NMDA 受體變化與BBB 的通透性變化有關(guān)。表明電磁輻射可能導致大鼠海馬組織中NMDA 受體發(fā)生變化,而NMDA 受體可以介導Ca2 + 的通透性,當Ca2 + 的通透性發(fā)生變化時(shí),BBB 的通透性發(fā)生變化。而NMDA 變化與學(xué)習記憶的變化有關(guān)。輻射可以導致BBB 通透性的變化,可以使細胞發(fā)生凋亡導致學(xué)習記憶損壞。

  本實(shí)驗通過(guò)高頻輻射輻射大鼠后,可見(jiàn)硝酸鑭顆粒透過(guò)TJ 有所沉積,TJ 處也可見(jiàn)鑭顆粒沉積,有些硝酸鑭顆粒甚至已經(jīng)達到星形細胞周?chē),說(shuō)明TJ 連接間隙的增大,BBB 通透性增強。通過(guò)TEM 對海馬BBB 的超微結構的觀(guān)察,可以得出高頻輻射后BBB 通透性的增加是大鼠記憶損傷的原因之一。由6 h 時(shí)和24 h 時(shí)TEM 圖片相發(fā)現,只有B 組有明顯區別, 24 h 時(shí)可見(jiàn)硝酸鑭擴散出血管的量明顯比6 h時(shí)的多,其他組差異不顯著(zhù)。說(shuō)明高頻輻射輻射6h 時(shí)后,BBB 的通透性是逐漸變大的,可以推測大鼠24 h的記憶損傷比較嚴重。

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